DOSAGE DU CALCIUM PLASMATIQUE ET URINAIRE

 

Principe :

Dosage direct du calcium sans déprotéinisation grâce à la formation d'un complexe avec l'ortho crésolphtaléine. L'hydroxy 8 quinoléine évite l'interférence des ions Mg2+ jusqu'à la concentration de 4 mmol/l.

Matériel :

3 tubes neufs de 5 ml, réactifs, photomètre.

Ils est indispensable de prendre des tubes neufs, des cônes de pipette neufs et des flacons à réactifs rincés à l'acide chlorhydrique 1 N (faire tremper 30 minutes) puis rincés à l'eau distillée.

Prélèvement :

Pratiquer un prélèvement de sang veineux recueilli sans anticoagulant. Centrifuger et recueillir le sérum.

Pour les urines, préférer un échantillon de 5 ml d'urines de 24 heures homogénéisées que l'on centrifugera rapidement.

Technique : On préférera un étalon à 2.5 mmol/l (milieu des valeur normales)

	BLANC	ÉTALON	SÉRUM	URINE
Sérum, urine ou étalon		20 µl	20 µl	10 µl
NaCl 0.9 %				10 µl
Réactif final	1 ml	1 ml	1 ml	1 ml
Mélanger les tubes, photométrer après 5 minutes à 570-580 nm.

• La coloration obtenue est stable une heure.
• Calcul de la concentration, C étant la concentration de l'étalon :

[(Absorbance patient) / (Absorbance étalon)] X C

• Les mesures sont linéaires de 0 à 4 mmol/l. Diluer en conséquence.

Réactifs:

Réactif de coloration : mélanger dans 500 ml d'eau distillée :

• Ortho crésolphtaléine : 52 mg
• 8-hydroxyquinoléine : 0.75 g

Réactif alcalin (pH >11) : mélanger dans 500 ml d'eau distillée :

• Amino 2 methyl 2 propanol 1 : 21.6 g

Ces deux réactifs sont stables 2 mois à température ambiante et 6 mois au réfrigérateur.

Le réactif final est obtenu en mélangeant ces deux réactifs en parties égales. Stabilité de 10 jours à température ambiante et d'un mois au réfrigérateur.

Fiche technique :

CALCIUM	Dosage	Cond	Prix	Revend.	Référence	Temps de manipulation	7	mn
						Temps d'incubation	5	mn
Ortho crésolphtaléine	solide	25g	261 F	Fisher	A4776055	Frais d'eau distillée	0.02 F
8 hydroxyquinoléine	solide	100g	256 F	Fisher	A4824357	Frais de chauffage	- F
Amino 2 méthyl 2 propanol	solide	500g	575 F	Sigma	A5888	Consommables + étalon	0.50 F
		TOTAL	1 092 F			Total frais annexes	0.52 F
		pour	22 000	tests		Amortissement photomètre	1.00 F
		soit	15 000	patients		Coût en réactif par test	0.07 F
Coût au test par patient	0.07 F					Forfait technicien	0.50 F
Poids du kit	0.7 Kg					Total général	2.09 F